注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2）粉末溶解前请先短暂离心，以保证产品全在管底。

3）本产品仅用于科研用途，禁止用于人身上。

使用浓度

【具体使用浓度请参考相关文献，并根据自身实验条件（如实验目的，细胞种类，培养特性等）进行摸索和优化。】

相关实验（数据来自于公开发表的文献，仅供参考）

（一）细胞实验

为测定细胞的活力，用B-DIM，Erlotinib或组合处理，将BxPC-3和MIAPaCa细胞接种（每孔3000-5000）在96孔板中并在37℃孵育过夜。首先对B-DIM（10-50 μM）和Erlotinib（1-5 μM）的使用浓度范围进行测试。基于初始测试结果，选择B-DIM（20 μM）和Erlotinib（2 μM）的浓度进行实验。使用B-DIM（20 μM），Erlotinib（2 μM）或是组合对BxPC-3和MIAPaCa细胞处理72小时后通过标准MTT法测定并重复三次，通过Tecan微孔板荧光计在595 nm处测量荧光强度。DMSO处理的细胞被作为是未处理的对照并且被设定为100％的值。除上述检测外，我们还进行了克隆形成试验，以评估治疗效果^[1]。

（二）动物实验

小鼠^[1]

将雌性ICR-SCID（6-7周龄）小鼠随机分成以下组别（n=7）：(a）未治疗的对照；（b）仅B-DIM（50 mg / kg体重）处理，每天一次胃内注射；（c）Erlotinib（50 mg/kg体重）处理，每天腹腔注射，为期15天；（d）B-DIM和Erlotinib，按照时间表进行个别治疗，在最后一次治疗后第3天处死所有小鼠，并测量它们的体重。将一部分组织在液氮中快速冷冻并储存在-70℃备用，另一部分在福尔马林中固定并制成石蜡块，固定组织切片使用H＆E染色用于确认每个胰腺中肿瘤的存在^[2]。

大鼠^[2]

使用体重为180 g至210 g的6周龄雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠，用生理盐水配置1 mg/mL的顺铂（CP）溶液，需现配，然后在第0天以7 mg/kg的剂量腹腔注射SD大鼠（n=28）。为了研究Erlotinib的作用，28只CP-N-大鼠分为两组，从第-1天（在CP注射前24小时）开始，每天每只动物通过服用给药Erlotinib（20 mg/kg）（CP+E，n=14）或载体（CP+V，n=14）至第3天，媒介物处理组注射等量的生理盐水。将5只6周龄的雄性SD大鼠用作为正常对照组（NC，n=5）。从第-1天到第3天，通过服用给药每天给NC大鼠施用等量的生理盐水，在第4天（CP注射后96小时）将每只大鼠麻醉并在心脏穿刺后通过放血处死；通过心脏穿刺收集血液并收集肾脏。将肾组织分开；将分开的部分在液氮中快速冷冻或在2％多聚甲醛/膦酸盐缓冲盐水（PBS）中固定以备后用，所有手术均在乙mi气体麻醉下进行。

参考文献

[1]. Ali S, et al. Apoptosis-inducing effect of erlotinib is potentiated by 3,3-diindolylmethane in vitro and in vivo using an orthotopic model of pancreatic cancer. Mol Cancer Ther, 2008, 7(6), 1708-1719.

[2]. Wada Y, et al. Epidermal growth factor receptor inhibition with erlotinib partially prevents cisplatin-induced nephrotoxicity in rats. PLoS One. 2014 Nov 12;9(11):e111728.

HB190128