使用SDS-PAGE测定蛋白质分子量是一种广泛用于生物化学和分子生物学领域的技术。SDS-PAGE，即十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳，它主要用于分离蛋白质，并通过比较样品中蛋白质的迁移距离与已知分子量的标准蛋白质进行比对，从而估算蛋白质的分子量。该方法具有操作简便、分辨率高等优点，是蛋白质研究中不可或缺的工具。

SDS-PAGE的核心在于利用十二烷基硫酸钠（SDS）与蛋白质结合来破坏其天然构象，使其变性并赋予蛋白质一个负电荷。此时，蛋白质的迁移速率仅取决于其大小而非形状或电荷。因此，在施加电场时，小分子量的蛋白质会比大分子量的蛋白质迁移得更快。通过与标准蛋白质的比较，可以推测未知蛋白质的分子量。

一、使用SDS-PAGE测定蛋白质分子量的技术步骤

1.样品准备

样品需要在含有SDS的缓冲液中煮沸变性，以确保蛋白质完全展开。通常，还需要加入还原剂（如β-巯基乙醇）以断裂二硫键，从而进一步确保蛋白质的线性状态。

2.凝胶制备

聚丙烯酰胺凝胶的浓度会影响分离效果。一般情况下，使用浓度梯度凝胶能够在同一实验中分离不同分子量范围的蛋白质。凝胶的制备需要精确控制，以保证实验结果的重复性和可靠性。

3.电泳操作

将处理好的样品上样到凝胶孔中，应用电场后，蛋白质在电场的作用下开始迁移。通常电泳过程需要持续约1-2小时，具体时间视凝胶浓度和电泳电压而定。

4.染色与去染

完成电泳后，凝胶需要进行染色以便观察蛋白质条带。常用的染色剂有考马斯亮蓝和银染等。染色后需要进行去染，以减小背景噪音，提高条带的清晰度。

5.分子量估算

通过将样品条带与标准分子量标记的蛋白质条带在同一凝胶上进行比对，可以通过已知分子量的标记蛋白质的迁移距离绘制标准曲线，从而估算样品蛋白质的分子量。

二、应用与局限

在蛋白质研究中，SDS-PAGE被广泛用于蛋白质纯化、结构分析、表达检测及功能研究等多个领域。它不仅能够帮助科学家确定蛋白质的纯度，还可以用于多种蛋白质的鉴定。但使用SDS-PAGE测定蛋白质分子量也存在如对极大分子量或极小分子量蛋白质的分辨率下降，以及难以区分具有相似分子量但不同结构的蛋白质等问题。因此，常与其他技术组合使用以获取更全面的信息。

使用SDS-PAGE测定蛋白质分子量因其精确性和操作简便性，已经成为生物科学研究中不可替代的实验方法。通过对该方法的不断优化和改进，科学家们能够更准确地解析蛋白质的性质及其在生命活动中的作用。

百泰派克生物科技特色项目

一、蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。

※服务优势：

1.采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;

6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

二、蛋白质组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

※服务优势：

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;

2.体内体外多种蛋白质标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;

5.专业生物信息学分析，分析更系统准确。

三、单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，然后用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，最后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

※服务优势：

1.技术先进，填补技术空白

采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标同时进行表征，百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。

2.分析数量大，成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从最小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。

五、生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

百泰派克生物科技七大检测平台

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等专业服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

1.公司采用ISO9001质量控制体系，专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；

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