荧光偏振法分析蛋白质与配体的相互作用是指通过荧光偏振技术，在不破坏生物体系的情况下，实时观察和量化蛋白质与配体的结合情况。其基本原理是基于荧光标记配体与目标蛋白结合后，体系的荧光偏振值会发生变化，从而反映结合事件。荧光偏振（FP）是基于荧光分子的特性来研究生物分子相互作用的技术。当一个荧光分子被平面偏振光激发时，如果它在激发态寿命期间不发生转动，那么发射光将保持和激发光相同的偏振方向。对于小分子荧光物质，由于其分子小、转动速度快，发射光的偏振程度较低。而当小分子荧光配体与大分子蛋白质结合后，其转动受到限制，发射光的偏振程度会增加。这种偏振程度的变化可以用来衡量蛋白质与配体之间的相互作用。通过荧光偏振法分析蛋白质与配体的相互作用不仅可以用于理解生物学机制，还在药物开发、疾病研究、诊断工具开发中发挥作用。 在药物开发过程中，了解化合物与生物大分子的结合特性对于筛选潜在药物至关重要。通过荧光偏振法，科学家可以高效地筛选出结合力强的候选药物分子，并进一步优化其结构，提高药物的选择性和效力。此外，该技术还被广泛应用于研究酶与抑制剂、受体与配体等多种生物分子间的相互作用。由于荧光偏振法分析蛋白质与配体的相互作用具有高灵敏度、可实时检测等优点，它成为许多实验室研究生物分子相互作用的首选方法之一。

一、实验步骤

1、荧光标记配体的制备

选择合适的荧光染料来标记配体。常用的荧光染料有荧光素（FITC）、罗丹明等。标记过程要确保荧光染料与配体的结合不影响配体与蛋白质的相互作用。例如，对于一个小分子药物配体，可以通过化学反应将荧光染料连接到配体上的特定官能团，如氨基或羧基。

2、蛋白质和标记配体的混合

将纯化后的蛋白质与标记好的配体在合适的缓冲溶液中混合。缓冲溶液的选择一般要维持合适的 pH、离子强度等条件。例如，在研究酶与底物类似物配体的相互作用时，常用的缓冲液有 Tris - HCl 缓冲液（pH 7.4 - 8.0）。然后在不同的配体浓度下进行实验，以获得完整的结合曲线。可以通过逐步增加配体浓度，同时保持蛋白质浓度不变来实现。

3、荧光偏振测量

使用荧光偏振仪进行测量。在测量时，需要设置合适的激发光波长和发射光波长，这取决于所使用的荧光染料。例如，对于 FITC 标记的配体，激发光波长一般为 488nm，发射光波长为 520nm 左右。仪器会自动测量并记录不同样品的荧光偏振值。测量过程中要注意保持仪器的稳定性，避免温度变化、震动等因素对测量结果的影响。

二、注意事项

1、荧光标记选择：荧光标记的选择需考虑其光稳定性和荧光量子产率，以确保检测的灵敏度和准确性。

2、实验条件的标准化：确保在实验过程中，温度、pH值等条件的一致性，以避免对实验结果的影响。

3、数据分析的准确性：在数据分析中，需考虑背景荧光等因素的影响，以提高结果的可靠性。

三、常见问题

1、非特异性结合：在某些情况下，荧光标记物可能与其他蛋白质发生非特异性结合，干扰实验结果。解决方案包括优化实验条件，或使用更高选择性的标记物。

2、信号稳定性：长时间实验中，荧光信号可能发生漂移。需要定期校准设备，或使用内标进行校正。

荧光偏振法能够在低样品消耗的情况下提供高灵敏度的检测，有助于高通量筛选，并且能够实时监测蛋白质与配体的动态变化，非常适合用于研究快速反应过程。 百泰派克生物科技在荧光偏振法分析蛋白质与配体的相互作用领域拥有丰富的经验和成熟技术。我们提供专业的蛋白质相互作用分析服务，帮助客户准确、高效地分析生物分子相互作用。我们的专家团队致力于为客户提供定制化解决方案，确保每一个实验都达到最优效果。

百泰派克生物科技特色项目

一、蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。

※服务优势：

1.采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;

6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

二、蛋白质组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

※服务优势：

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;

2.体内体外多种蛋白质标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;

5.专业生物信息学分析，分析更系统准确。

三、单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，然后用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，最后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

※服务优势：

1.技术先进，填补技术空白

采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标同时进行表征，百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。

2.分析数量大，成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从最小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。

五、生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

百泰派克生物科技七大检测平台

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等专业服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

1.公司采用ISO9001质量控制体系，专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；

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