Hieff® Superfast DNA Methylation Bisulfite Kit DNA超快速DNA亚硫酸氢盐转化试剂盒(柱式)
产品名称: Hieff® Superfast DNA Methylation Bisulfite Kit DNA超快速DNA亚硫酸氢盐转化试剂盒(柱式)
英文名称: Hieff® Superfast DNA Methylation Bisulfite Kit DNA超快速DNA亚硫酸氢盐转化试剂盒(柱式)
产品编号: 12225ES10
产品价格: 435.00
产品产地: Yeasen
品牌商标: Yeasen
更新时间: 2024-12-10T11:18:52
使用范围: null
规格 | 价格 |
10T | 435.0 |
50T | 2175.0 |
- 联系人 : 李自转
- 地址 : 上海市浦东新区天雄路166弄一号楼三层南单元
- 邮编 : 200030
- 所在区域 : 上海
- 电话 : 139****5640 点击查看
- 传真 : 点击查看
- 邮箱 : lizizhuan@yeasen.com
- 二维码 : 点击查看
产品简介
Hieff® Superfast DNA Methylation Bisulfite Kit超快速DNA亚硫酸氢盐转化试剂盒(柱式)可以快速地将DNA样品中的未甲基化胞嘧啶转化成尿嘧啶而甲基化胞嘧啶维持不变,双链DNA经过高温亚硫酸氢盐处理后,双链DNA解链变成单链,在HSO3-作用下,导致胞嘧啶残基发生脱氨基反应并将它们转化为尿嘧啶,甲基化修饰的残基保持不变。进而在后续PCR扩增过程中,尿嘧啶会被胸腺嘧啶(T)取代。转化反应时间仅需5 min;DNA投入量范围100 pg-2 μg; 未甲基化的胞嘧啶转化效率≥99%。转化后的产物适用于PCR扩增和NGS测序等下游应用。
产品信息
货号 |
12225ES10/12225ES50 |
规格 |
10T/50T |
组分信息
组分编号 |
组分名称 |
12225ES10 |
12225ES50 |
12225-A |
转化液 |
2 mL/瓶×1 |
3.3 mL/瓶×3 |
12225-B |
洗涤液 |
1.1 mL/瓶×1 |
5.5 mL/瓶×1 |
12225-C |
脱硫液 |
2.2 mL/瓶×1 |
11 mL/瓶×1 |
12225-D |
洗脱液 |
500 μL/管×1 |
1.5 mL管×1 |
12225-E |
纯化柱 |
10个 |
50个 |
12225-F |
收集管 |
10个 |
50个 |
注:10T/盒:向洗涤液中加入4.4 mL的无水乙醇;
50T/盒:向洗涤液中加入22 mL的无水乙醇;
加入无水乙醇后,颠倒混匀后备用,此时应将瓶盖拧紧,防止乙醇挥发影响试剂使用效果。
储存条件
12225-A转化液室温避光保存,其他组分室温保存,有效期12个月。
注意事项
- 为保证下游实验的顺利进行,进行转化步骤时,应对投入的DNA总量进行精确定量,推荐使用Qubit3.0/4.0对投入DNA进行定量,且A260 / A280比值在1.7 - 1.9之间;
- DNA投入量范围100 pg-2 μg,最佳投入量为100 ng - 1 μg,过低不利于下游检测,过高可能导致回收率/转化效率降低。
- 转化液/脱硫液/洗涤液中含有挥发性组分,使用完毕后,应及时拧紧瓶盖,室温储存。
- 转化后样本,应及时进行下游实验,若短暂储存,可置于-20℃,长期储存可置于-80℃。
- 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
- 本产品仅作科研用途!
使用说明
试剂及耗材准备:1.5 mL的无菌离心管,无菌枪头,无核酶水,无水乙醇,PCR管;
- 亚硫酸氢盐转化:
- 根据需要实验的样本数量,准备相应的无菌PCR管,并按照下表要求配制反应体系:
- 转化体系
组分 |
体积 |
投入DNA |
100 pg-2 μg |
转化液 |
180 μL |
ddH2O |
Up to 150 μL |
总体积 |
200 μL |
用移液器将上述体系吹打混匀或短暂涡旋混匀5 s,短暂离心,将反应液离心至PCR管底部。
- 注意:1. 此时PCR管中反应液总体积为200 μL,为使转化更充分,应在步骤2)吹打混匀后,将反应液等分,转移至新的无菌PCR管中,运行转化程序。转化结束后,将两个PCR管中的反应液合并至同一个纯化柱中进行纯化。
- 如果样本体积在 20-40 μL 之间,则减少转化液的体积,总体积保持200 μL。
- 如果样本体积为50 μL,则转化液加入150 μL,总体积保持200 μL,转化时间延长至6 min以上。
3)CT转化程序设置
温度 |
时间 |
98 ℃ |
5 min |
4 ℃ |
∞ |
将PCR管置于预设好程序的PCR仪上,进行上述反应。
- 转化产物纯化
- 准备好相应样本个数的纯化柱套件,将200 μL的转化后的反应液转移至纯化柱中,13000 g离心30-60 s,丢弃滤液,将纯化柱重新放于收集管中;
- 向纯化柱中加入100 μL的洗涤液(确认已经添加无水乙醇),13000 g离心30-60s,丢弃滤液,将纯化柱重新放于收集管中;
- 向纯化柱中加入200 μL的脱硫液,于室温中静置反应20 min,反应结束后13000 g离心30-60 s,丢弃滤液,将纯化柱重新放于收集管中;
- 向纯化柱中加入200 μL的洗涤液,13000 g离心30-60s,丢弃滤液,将纯化柱重新放于收集管中;
- 重复步骤4)一次;
- 将纯化柱转移至准备好的1.5 mL的离心管中,开盖晾干后,加入10-30 μL的洗脱液至滤膜中央,室温静置1min后,13000 g离心1 min,收集洗脱液;
- 将洗脱后的样本置于-20 ℃暂存,若长期保存,请将样本置于-80 ℃保存,同时应避免不必要的反复冻融。
注:纯化后转化产物可直接用于后续PCR反应或测序流程。
Ver.CN20240222