Hieff® Superfast DNA Methylation Bisulfite Kit DNA超快速DNA亚硫酸氢盐转化试剂盒(柱式)-常用生化试剂-试剂-生物在线
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Hieff® Superfast DNA Methylation Bisulfite Kit DNA超快速DNA亚硫酸氢盐转化试剂盒(柱式)

Hieff® Superfast DNA Methylation Bisulfite Kit DNA超快速DNA亚硫酸氢盐转化试剂盒(柱式)

商家询价

产品名称: Hieff® Superfast DNA Methylation Bisulfite Kit DNA超快速DNA亚硫酸氢盐转化试剂盒(柱式)

英文名称: Hieff® Superfast DNA Methylation Bisulfite Kit DNA超快速DNA亚硫酸氢盐转化试剂盒(柱式)

产品编号: 12225ES10

产品价格: 435.00

产品产地: Yeasen

品牌商标: Yeasen

更新时间: 2024-12-10T11:18:52

使用范围: null

规格 价格
10T 435.0
50T 2175.0
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产品简介

Hieff® Superfast DNA Methylation Bisulfite Kit超快速DNA亚硫酸氢盐转化试剂盒(柱式)可以快速地将DNA样品中的未甲基化胞嘧啶转化成尿嘧啶而甲基化胞嘧啶维持不变,双链DNA经过高温亚硫酸氢盐处理后,双链DNA解链变成单链,在HSO3-作用下,导致胞嘧啶残基发生脱氨基反应并将它们转化为尿嘧啶,甲基化修饰的残基保持不变。进而在后续PCR扩增过程中,尿嘧啶会被胸腺嘧啶(T)取代。转化反应时间仅需5 min;DNA投入量范围100 pg-2 μg; 未甲基化的胞嘧啶转化效率≥99%。转化后的产物适用于PCR扩增和NGS测序等下游应用。

 

产品信息

货号

12225ES10/12225ES50

规格

10T/50T

 

组分信息

组分编号

组分名称

12225ES10

12225ES50

12225-A

转化液

2 mL/瓶×1

3.3 mL/瓶×3

12225-B

洗涤液

1.1 mL/瓶×1

5.5 mL/瓶×1

12225-C

脱硫液

2.2 mL/瓶×1

11 mL/瓶×1

12225-D

洗脱液

500 μL/管×1

1.5 mL管×1

12225-E

纯化柱

10个

50个

12225-F

收集管

10个

50个

注:10T/盒:向洗涤液中加入4.4 mL的无水乙醇;

50T/盒:向洗涤液中加入22 mL的无水乙醇;

加入无水乙醇后,颠倒混匀后备用,此时应将瓶盖拧紧,防止乙醇挥发影响试剂使用效果。

 

储存条件  

12225-A转化液室温避光保存,其他组分室温保存,有效期12个月。

 

注意事项

  1. 为保证下游实验的顺利进行,进行转化步骤时,应对投入的DNA总量进行精确定量,推荐使用Qubit3.0/4.0对投入DNA进行定量,且A260 / A280比值在1.7 - 1.9之间;
  2. DNA投入量范围100 pg-2 μg,最佳投入量为100 ng - 1 μg,过低不利于下游检测,过高可能导致回收率/转化效率降低。
  3. 转化液/脱硫液/洗涤液中含有挥发性组分,使用完毕后,应及时拧紧瓶盖,室温储存。
  4. 转化后样本,应及时进行下游实验,若短暂储存,可置于-20℃,长期储存可置于-80℃。
  5. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
  6. 本产品仅作科研用途!

 

使用说明

试剂及耗材准备:1.5 mL的无菌离心管,无菌枪头,无核酶水,无水乙醇,PCR管;

  1. 亚硫酸氢盐转化:
  1. 根据需要实验的样本数量,准备相应的无菌PCR管,并按照下表要求配制反应体系:
  2. 转化体系

组分

体积

投入DNA

100 pg-2 μg

转化液

180 μL

ddH2O

Up to 150 μL

总体积

200 μL

用移液器将上述体系吹打混匀或短暂涡旋混匀5 s,短暂离心,将反应液离心至PCR管底部。

  1. 注意:1. 此时PCR管中反应液总体积为200 μL,为使转化更充分,应在步骤2)吹打混匀后,将反应液等分,转移至新的无菌PCR管中,运行转化程序。转化结束后,将两个PCR管中的反应液合并至同一个纯化柱中进行纯化。
  1. 如果样本体积在 20-40 μL 之间,则减少转化液的体积,总体积保持200 μL。
  2. 如果样本体积为50 μL,则转化液加入150 μL,总体积保持200 μL,转化时间延长至6 min以上。

3)CT转化程序设置

温度

时间

98 ℃

5 min

4 ℃

将PCR管置于预设好程序的PCR仪上,进行上述反应。

  1. 转化产物纯化
  1. 准备好相应样本个数的纯化柱套件,将200 μL的转化后的反应液转移至纯化柱中,13000 g离心30-60 s,丢弃滤液,将纯化柱重新放于收集管中;
  2. 向纯化柱中加入100 μL的洗涤液(确认已经添加无水乙醇),13000 g离心30-60s,丢弃滤液,将纯化柱重新放于收集管中;
  3. 向纯化柱中加入200 μL的脱硫液,于室温中静置反应20 min,反应结束后13000 g离心30-60 s,丢弃滤液,将纯化柱重新放于收集管中;
  4. 向纯化柱中加入200 μL的洗涤液,13000 g离心30-60s,丢弃滤液,将纯化柱重新放于收集管中;
  5. 重复步骤4)一次;
  6. 将纯化柱转移至准备好的1.5 mL的离心管中,开盖晾干后,加入10-30 μL的洗脱液至滤膜中央,室温静置1min后,13000 g离心1 min,收集洗脱液;
  7. 将洗脱后的样本置于-20 ℃暂存,若长期保存,请将样本置于-80 ℃保存,同时应避免不必要的反复冻融。

注:纯化后转化产物可直接用于后续PCR反应或测序流程。

 

Ver.CN20240222