糖基化位点（Glycosylation Site）是指蛋白质分子中发生糖基化修饰的特定氨基酸残基位置。在该位点上，酶会催化将糖分子（如寡糖）共价连接到蛋白质上，从而形成糖蛋白。糖基化是一种重要的翻译后修饰（PTM），对蛋白质的结构、稳定性、功能以及细胞间通信等具有深远影响。在生命科学研究和生物制药中，糖基化位点的识别与功能研究已成为精准医学与生物标志物开发的重要方向。

一、糖基化的类型与位点特征

1、N-糖基化（N-linked Glycosylation）

• 修饰位点：天冬酰胺（Asn, N）
• 典型序列：N-X-S/T（X≠脯氨酸）
• 修饰起点：内质网，后续在高尔基体中进一步加工
• 糖链类型：高甘露糖型、复合型、杂合型

N-糖基化是结构明确、研究相对成熟的糖基化形式，对蛋白质折叠、运输及细胞表面表达有重要调控作用。

2、O-糖基化（O-linked Glycosylation）

• 修饰位点：丝氨酸（Ser）或苏氨酸（Thr）
• 无统一序列特征，主要依赖糖基转移酶的底物特异性
• 发生场所：高尔基体
• 常见糖型：Tn抗原、核心1/2结构、唾液酸修饰结构等

O-糖基化多见于膜蛋白、分泌蛋白，广泛参与黏附、信号转导和免疫识别。

二、糖基化位点的功能与生物学意义

1、增强蛋白质结构稳定性

糖基化位点往往位于蛋白质表面，有助于稳定三维结构、提高热稳定性，并防止错误折叠与聚集。

2、调节蛋白功能

• 改变蛋白-蛋白或蛋白-受体之间的相互作用
• 调控酶活性、信号通路激活与转导效率
• 影响细胞识别与粘附特性（如糖类识别受体）

3、决定蛋白亚细胞定位与半衰期

糖基化修饰参与蛋白质的细胞内运输，如内质网到高尔基体的转运，并通过屏蔽降解位点来延长蛋白寿命。

4、与疾病密切相关

异常糖基化位点或糖链结构常见于多种疾病：

• 肿瘤：癌相关糖基化（如Tn、sTn、Lewis抗原）常用于肿瘤标志物筛查
• 神经退行性疾病：糖基化异常与阿尔茨海默病、帕金森病有关
• 先天性糖基化障碍（CDG）：由糖基化酶基因突变引起的代谢疾病

三、如何研究糖基化位点？

1、质谱分析（Mass Spectrometry）

现代糖组学研究以质谱为核心技术，可实现糖基化位点的高通量筛查、结构解析与定量分析：

（1）LC-MS/MS结合HCD、ETD等碎裂方式，实现糖肽及其修饰位点的精确识别

（2）HILIC富集提高低丰度糖肽的检出效率

（3）糖肽映射可同时分析糖链类型与位点特异性

2、富集策略

糖基化修饰的多样性与低丰度特征使其检测难度大，常见富集方法包括：

（1）Lectin亲和富集：使用不同糖结合蛋白选择性捕获糖肽

（2）HILIC富集：基于糖肽极性提高选择性

（3）Hydrazide化学法：氧化糖链并共价结合载体，适用于糖蛋白整体富集

3、生物信息学预测与验证

NetNGlyc、GlycoMine等工具可预测潜在糖基化位点，但仅供参考。实验验证仍是确认糖基化位点是否真实存在的金标准。

四、糖基化位点研究的实际应用价值

1、生物标志物开发：糖基化模式改变常用于疾病早筛与分型。如AFP-L3（α-胎蛋白特定糖型）广泛用于肝癌诊断。

2、生物药一致性与质量控制：糖基化影响抗体药物的免疫效应（如ADCC、CDC），也是中试放大和生产过程中的关键质量属性（CQA）。

3、疫苗设计与靶点发现：病原体的糖基化结构常参与免疫逃逸，靶向这些糖基化位点可增强疫苗效果或开发新型治疗抗体。

糖基化位点不仅是理解蛋白质功能的关键窗口，也是疾病机制研究、靶点药物开发和生物标志物发现的重要突破口。在生物药开发中，控制糖基化位点和糖型对于产品质量一致性和临床疗效具有决定性作用。百泰派克生物科技整合高分辨质谱平台与先进的糖组学分析流程，致力于为科研与企业客户提供全面、精准、可重复的糖基化研究解决方案，助力从基础研究到转化医学的每一步。

百泰派克生物科技特色项目

一、蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。

※服务优势：

1.采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;

6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

二、蛋白质组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

※服务优势：

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;

2.体内体外多种蛋白质标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;

5.专业生物信息学分析，分析更系统准确。

三、单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，然后用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，最后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

※服务优势：

1.技术先进，填补技术空白

采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标同时进行表征，百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。

2.分析数量大，成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从最小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。

五、生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

百泰派克生物科技七大检测平台

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等专业服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

1.公司采用ISO9001质量控制体系，专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；

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