Western Blot条带定量分析是蛋白质研究中的技术之一，主要用于检测特定蛋白的表达水平，并通过条带的灰度强度进行相对或绝对定量分析。Western Blot（WB）技术基于蛋白质的电泳分离、抗体特异性识别及化学或荧光信号检测，它能够在复杂样本中精准识别目标蛋白。与传统的Western Blot检测相比，Western Blot条带定量分析不仅关注蛋白的有无，还通过图像分析软件计算蛋白条带的光密度，从而获得目标蛋白的相对丰度信息。这种分析方式广泛应用于生命科学研究，如细胞信号通路分析、疾病生物标志物筛选、药物筛选及蛋白功能验证等。此外，Western Blot条带定量分析还能用于比较不同实验条件下蛋白的表达变化，如药物处理前后的蛋白水平差异、生理病理状态下蛋白的动态调控等。在数据分析过程中，Western Blot条带定量分析通常使用ImageJ等软件计算条带的灰度值并通过归一化策略校正实验误差，归一化方法通常包括内参蛋白归一化和总蛋白归一化。内参归一化方法以稳定表达的蛋白（如GAPDH、β-Actin）作为参照，将目标蛋白信号与内参蛋白信号比值计算相对表达量。但是由于某些实验条件可能影响内参蛋白的稳定性，近年来总蛋白归一化方法也受到关注，即通过蛋白染色（如Ponceau S或Coomassie Blue）测定总蛋白量，以提高定量的可靠性。此外，在数据统计时，研究人员通常采用三次以上的独立重复实验，并使用合适的统计方法（如t检验或方差分析）评估蛋白表达的显著性差异，以确保实验结论的科学性。

Western Blot条带定量分析的实验流程包括蛋白质提取、蛋白定量、SDS-PAGE凝胶电泳、蛋白转膜、抗体孵育、信号检测及数据分析等步骤。首先，从细胞或组织样本中提取总蛋白，并利用BCA或Bradford方法进行蛋白定量，以确保不同样本间蛋白上样量的一致性。随后，利用SDS-PAGE凝胶电泳分离蛋白质，并将其转移至PVDF或NC膜。为了确保检测的特异性，实验人员使用针对目标蛋白的特异性抗体进行孵育，并采用化学发光（ECL）或荧光检测系统记录信号。在条带成像后，通过图像分析软件（如ImageJ、GraphPad Prism或Image Lab）对Western Blot条带的灰度值进行定量，并以内参蛋白（如β-Actin、GAPDH或Tubulin）进行归一化，以校正实验误差，提高数据的可比性。

Western Blot条带定量分析具有诸多优势，使其成为蛋白质研究中的常用技术之一。首先，该方法对目标蛋白的检测具有较高的特异性和灵敏度，能够区分不同分子量的蛋白并准确测量其表达水平。其次，该技术能够实现半定量甚至相对定量分析，适用于蛋白表达差异研究。此外，Western Blot条带定量分析可与其他生物学方法（如qPCR、ELISA、免疫共沉淀等）结合，为蛋白质表达调控研究提供多层次的数据支持。但是该技术也存在一定的局限性。例如，Western Blot的结果受抗体质量影响较大，非特异性结合可能导致假阳性或背景噪声增加；此外蛋白转膜效率及信号检测方法的选择也可能影响最终的定量结果。因此，在实验过程中，研究人员需严格控制实验条件，如优化抗体稀释浓度、采用均一的蛋白上样量及标准化的曝光时间，以提高数据的准确性和重复性。

百泰派克生物科技致力于提供高质量的Western Blot研究服务，我们的实验团队在样本处理、蛋白电泳、抗体筛选及数据分析方面积累了丰富的经验，能够为客户提供高灵敏度、高重复性的Western Blot检测及定量分析服务。

百泰派克生物科技特色项目

一、蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。

※服务优势：

1.采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;

6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

二、蛋白质组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

※服务优势：

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;

2.体内体外多种蛋白质标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;

5.专业生物信息学分析，分析更系统准确。

三、单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，然后用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，最后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

※服务优势：

1.技术先进，填补技术空白

采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标同时进行表征，百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。

2.分析数量大，成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从最小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。

五、生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

百泰派克生物科技七大检测平台

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等专业服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

1.公司采用ISO9001质量控制体系，专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；

2.获国家CNAS实验室认可，为客户提供符合全球药政法规的药物质量研究服务；

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