构建MTB突变菌株(基因敲除法)
采用噬菌体介导的同源重组进行基因敲除:首先构建同源交换位点(AES),随后将其整合到结核分枝杆菌噬菌体基因组,获得噬菌粒(phasmid);将噬菌粒导入耻垢分枝杆菌,获得整合有同源交换位点的重组噬菌体,经体外扩增获得高滴度的重组噬菌体,对结核分枝杆菌进行转染;
质粒提取及基因克隆服务
最终提供:克隆构建的质粒及含有该质粒的菌种;可提供载体酶切位点简图或VectorNTI图谱,提供测序及序列比对结果、实验操作步骤。样品要求:基因组DNA(≥1 μg)、质粒(≥100 ng)
原核表达载体
原核表达载体http://www.axybio.com/vectorstrain/prokaryotic-expression-vector.html
稳定细胞株构建
生博提供:载体构建服务,也可以针对构建好的外源质粒DNA进行稳定筛选。针对质粒DNA的抗性标志,选择相应的药物,并对所需筛选的细胞进行药物测试,选择细胞全部凋亡时药物的最低浓度。